Matur nuwun kanggo ngunjungi Nature.com. Versi browser sing sampeyan gunakake nduweni dhukungan CSS sing winates. Kanggo asil paling apik, disaranake nggunakake browser anyar (utawa mateni mode kompatibilitas ing Internet Explorer). Ing sawetoro wektu, kanggo mesthekake dhukungan terus, kita bakal nampilake situs tanpa gaya lan JavaScript.
Nggawe model kewan saka modic change (MC) minangka dhasar penting kanggo sinau MC. Sèket papat terwelu Putih Selandia Baru dipérang dadi klompok operasi sham, klompok implantasi otot (kelompok ME) lan klompok implantasi nukleus pulposus (kelompok NPE). Ing grup NPE, cakram intervertebral kapapar kanthi pendekatan bedah lumbar anterolateral lan jarum digunakake kanggo puncture awak vertebral L5 cedhak piring pungkasan. NP diekstrak saka cakram intervertebral L1 / 2 kanthi jarum suntik lan disuntikake. Ngebor bolongan ing balung subchondral. Prosedur bedhah lan cara pengeboran ing grup implantasi otot lan grup operasi sham padha karo sing ana ing grup implantasi NP. Ing grup ME, sepotong otot dilebokake ing bolongan, nalika ing grup operasi sham, ora ana sing dilebokake ing bolongan kasebut. Sawise operasi, pemindaian MRI lan tes biologi molekuler ditindakake. Sinyal ing grup NPE diganti, nanging ora ana owah-owahan sinyal ketok ing grup sham-operasi lan grup ME. Pengamatan histologis nuduhake yen proliferasi jaringan abnormal diamati ing situs implantasi, lan ekspresi IL-4, IL-17 lan IFN-γ tambah ing grup NPE. Implantasi NP menyang balung subchondral bisa mbentuk model kewan MC.
Owah-owahan modic (MC) yaiku lesi saka endplate vertebral lan sumsum balung jejer sing katon ing magnetic resonance imaging (MRI). Padha cukup umum ing individu sing duwe gejala sing gegandhengan1. Kathah panaliten ingkang nandheske pentinge MC amargi hubunganipun kaliyan nyeri punggung (LBP)2,3. de Roos et al.4 lan Modic et al.5 independen pisanan diterangake telung jinis kelainan sinyal subchondral ing sumsum balung vertebral. Owah-owahan modic jinis I yaiku hypointense ing urutan T1-bobot (T1W) lan hyperintense ing urutan T2-bobot (T2W). Lesi iki nuduhake endplates fisura lan jaringan granulasi vaskular jejer ing sumsum balung. Owah-owahan modic jinis II nuduhake sinyal dhuwur ing urutan T1W lan T2W. Ing jinis lesi iki, karusakan endplate bisa ditemokake, uga penggantian lemak histologis saka sumsum balung sing jejer. Owah-owahan modic jinis III nuduhake sinyal kurang ing urutan T1W lan T2W. Lesi sclerotic sing cocog karo endplates wis diamati6. MC dianggep minangka penyakit patologis balung mburi lan ana hubungane karo akeh penyakit degeneratif saka spine7,8,9.
Ngelingi data sing kasedhiya, sawetara studi wis menehi katrangan rinci babagan etiologi lan mekanisme patologis MC. Albert et al. nyaranake yen MC bisa disebabake herniasi disk8. Hu et al. MC amarga degenerasi disk sing abot10. Kroc ngusulake konsep "pecah cakram internal," sing nyatakake yen trauma cakram sing bola-bali bisa nyebabake microtears ing endplate. Sawise pembentukan sumbing, karusakan endplate dening nucleus pulposus (NP) bisa nyebabake respon otoimun, sing luwih ndadékaké pangembangan MC11. Mbah et al. nuduhake tampilan sing padha lan nglaporake manawa autoimunitas sing diakibatake NP duwe peran penting ing patogenesis MC12.
Sel sistem imun, utamane limfosit pembantu CD4 + T, nduweni peran kritis ing patogenesis autoimun13. Subset Th17 sing mentas ditemokake ngasilake sitokin proinflamasi IL-17, ningkatake ekspresi chemokine, lan ngrangsang sel T ing organ sing rusak kanggo ngasilake IFN-γ14. Sel Th2 uga nduweni peran unik ing patogenesis respon imun. Ekspresi IL-4 minangka sel Th2 perwakilan bisa nyebabake akibat imunopatologis sing abot15.
Sanajan akeh studi klinis sing ditindakake ing MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, isih ana kekurangan model eksperimen kewan sing cocog sing bisa niru proses MC sing asring kedadeyan ing manungsa lan bisa uga. digunakake kanggo neliti etiologi utawa perawatan anyar kayata terapi target. Nganti saiki, mung sawetara model kewan MC sing dilaporake kanggo nyinaoni mekanisme patologis sing ndasari.
Adhedhasar teori otoimun sing diusulake dening Albert lan Ma, panliten iki nggawe model MC terwelu sing prasaja lan bisa direproduksi kanthi autotransplanting NP cedhak piring ujung vertebral sing dibor. Tujuan liyane yaiku kanggo mirsani karakteristik histologis model kewan lan ngevaluasi mekanisme spesifik NP ing pangembangan MC. Kanggo tujuan iki, kita nggunakake teknik kayata biologi molekuler, MRI, lan studi histologis kanggo nyinaoni perkembangan MC.
Loro terwelu mati amarga getihen nalika operasi, lan papat terwelu mati nalika anestesi sajrone MRI. 48 terwelu isih bisa urip lan ora nuduhake pratandha prilaku utawa neurologis sawise operasi.
MRI nuduhake yen intensitas sinyal jaringan sing dipasang ing bolongan sing beda-beda beda. Intensitas sinyal awak vertebral L5 ing grup NPE mboko sithik diganti ing 12, 16 lan 20 minggu sawise selipan (urutan T1W nuduhake sinyal kurang, lan urutan T2W nuduhake sinyal campuran ditambah sinyal kurang) (Fig. 1C), nalika katon MRI saka rong klompok liyane bagean ditempelake tetep relatif stabil sak periode padha (Fig. 1A, B).
(A) Representative sequential MRIs saka terwelu lumbar spine ing 3 wektu titik. Ora ana kelainan sinyal sing ditemokake ing gambar grup operasi sham. (B) Karakteristik sinyal saka awak vertebral ing grup ME padha karo sing ana ing grup operasi sham, lan ora ana owah-owahan sinyal sing signifikan sing diamati ing situs embedding liwat wektu. (C) Ing grup NPE, sinyal kurang katon cetha ing urutan T1W, lan sinyal campuran lan sinyal kurang katon cetha ing urutan T2W. Saka periode 12 minggu nganti periode 20 minggu, sinyal dhuwur sporadis ngubengi sinyal kurang ing urutan T2W mudhun.
Hiperplasia balung sing jelas bisa dideleng ing situs implantasi awak vertebral ing grup NPE, lan hiperplasia balung luwih cepet saka 12 nganti 20 minggu (Gambar 2C) dibandhingake karo grup NPE, ora ana owah-owahan sing signifikan ing vertebral sing dimodelake. badan; Klompok Sham lan klompok ME (Gbr. 2C) 2A,B).
(A) Permukaan awak vertebral ing bagean sing ditanem banget Gamelan, bolongan waras apik, lan ora ana hiperplasia ing awak vertebral. (B) Bentuk situs sing ditanem ing klompok ME padha karo klompok operasi palsu, lan ora ana owah-owahan sing jelas ing tampilan situs sing ditanem liwat wektu. (C) Hiperplasia balung dumadi ing situs sing ditanem ing grup NPE. Hiperplasia balung mundhak kanthi cepet lan malah ngluwihi cakram intervertebral menyang awak vertebral kontralateral.
Analisis histologi nyedhiyakake informasi sing luwih rinci babagan pembentukan balung. Gambar 3 nuduhake foto bagean pasca operasi sing diwarnai H&E. Ing klompok operasi sham, kondrosit disusun kanthi apik lan ora ana proliferasi sel sing dideteksi (Gambar 3A). Kahanan ing grup ME padha karo grup operasi sham (Gambar 3B). Nanging, ing grup NPE, akeh kondrosit lan proliferasi sel kaya NP diamati ing situs implantasi (Gambar 3C);
(A) Trabekula bisa katon ing cedhak piring pungkasan, kondrosit disusun kanthi rapi kanthi ukuran lan wangun sel sing seragam lan ora ana proliferasi (40 kali). (B) Kahanan situs implantasi ing klompok ME padha karo klompok palsu. Trabekula lan kondrosit bisa dideleng, nanging ora ana proliferasi sing jelas ing situs implantasi (40 kali). (B) Bisa dideleng manawa kondrosit lan sel kaya NP proliferasi sacara signifikan, lan wangun lan ukuran kondrosit ora rata (40 kali).
Ekspresi interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA, lan interferon γ (IFN-γ) mRNA diamati ing grup NPE lan ME. Nalika tingkat ekspresi gen target dibandhingake, ekspresi gen IL-4, IL-17, lan IFN-γ tambah akeh ing grup NPE dibandhingake karo grup ME lan grup operasi palsu (Fig. 4) (P <0,05). Dibandhingake karo klompok operasi sham, tingkat ekspresi IL-4, IL-17, lan IFN-γ ing grup ME mung mundhak rada lan ora tekan owah-owahan statistik (P> 0,05).
Ekspresi mRNA IL-4, IL-17 lan IFN-γ ing grup NPE nuduhake tren sing luwih dhuwur tinimbang sing ana ing grup operasi palsu lan grup ME (P <0.05).
Ing kontras, tingkat ekspresi ing klompok ME ora nuduhake prabédan sing signifikan (P> 0.05).
Analisis Western blot ditindakake kanthi nggunakake antibodi sing kasedhiya kanthi komersial marang IL-4 lan IL-17 kanggo konfirmasi pola ekspresi mRNA sing diowahi. Kaya sing dituduhake ing Gambar 5A, B, dibandhingake karo klompok ME lan klompok operasi palsu, tingkat protein IL-4 lan IL-17 ing grup NPE tambah akeh (P <0.05). Dibandhingake karo klompok operasi palsu, tingkat protein IL-4 lan IL-17 ing klompok ME uga gagal nggayuh owah-owahan sing signifikan sacara statistik (P> 0,05).
(A) Tingkat protein IL-4 lan IL-17 ing klompok NPE luwih dhuwur tinimbang ing klompok ME lan klompok plasebo (P <0,05). (B) histogram Western blot.
Amarga jumlah sampel manungsa sing winates nalika operasi, studi sing jelas lan rinci babagan patogenesis MC rada angel. Kita nyoba nggawe model kewan MC kanggo nyinaoni mekanisme patologis sing potensial. Ing wektu sing padha, evaluasi radiologis, evaluasi histologis lan evaluasi biologi molekuler digunakake kanggo ngetutake dalan MC sing diakibatake dening autograft NP. Akibaté, model implantasi NP nyebabake owah-owahan bertahap ing intensitas sinyal saka 12-minggu nganti 20-minggu titik wektu (sinyal kurang campuran ing urutan T1W lan sinyal kurang ing urutan T2W), nuduhake owah-owahan jaringan, lan histologis lan molekuler. evaluasi biologi dikonfirmasi asil sinau radiologi.
Asil eksperimen iki nuduhake yen owah-owahan visual lan histologis dumadi ing situs pelanggaran awak vertebral ing grup NPE. Ing wektu sing padha, ekspresi gen IL-4, IL-17 lan IFN-γ, uga IL-4, IL-17 lan IFN-γ diamati, nuduhake yen pelanggaran jaringan pulposus nukleus autologous ing vertebral. awak bisa nimbulaké sawetara owah-owahan sinyal lan morfologis. Gampang ditemokake yen karakteristik sinyal saka badan vertebral model kewan (sinyal kurang ing urutan T1W, sinyal campuran lan sinyal kurang ing urutan T2W) meh padha karo sel vertebral manungsa, lan karakteristik MRI uga. konfirmasi pengamatan histologi lan anatomi kasar, yaiku, owah-owahan ing sel awak vertebral sing progresif. Senadyan respon inflamasi sing disebabake trauma akut bisa uga katon sakcepete sawise tusukan, asil MRI nuduhake yen owah-owahan sinyal sing saya tambah akeh katon 12 minggu sawise tusukan lan tetep nganti 20 minggu tanpa tandha-tandha pemulihan utawa mbalikke owah-owahan MRI. Asil kasebut nuduhake yen NP vertebral autologous minangka cara sing bisa dipercaya kanggo nggawe MV progresif ing terwelu.
Model tusukan iki mbutuhake skill, wektu, lan gaweyan bedhah sing cukup. Ing eksperimen awal, diseksi utawa stimulasi sing berlebihan saka struktur ligamen paravertebral bisa nyebabake pembentukan osteofit vertebral. Ati-ati kudu ditindakake supaya ora ngrusak utawa ngganggu cakram ing jejere. Amarga ambane penetrasi kudu dikontrol kanggo entuk asil sing konsisten lan bisa direproduksi, kita nggawe plug kanthi manual kanthi nglereni sarung jarum dawane 3 mm. Nggunakake plug iki njamin ambane pengeboran seragam ing awak vertebral. Ing eksperimen awal, telung ahli bedah ortopedi sing melu operasi kasebut nemokake jarum 16-gauge luwih gampang digarap tinimbang jarum 18-gauge utawa cara liya. Kanggo ngindhari pendarahan sing akeh banget nalika ngebor, nahan jarum sedhela bakal nyedhiyakake bolongan selipan sing luwih cocok, nuduhake yen tingkat MC tartamtu bisa dikontrol kanthi cara iki.
Senajan akeh pasinaon wis diangkah MC, sethitik dikenal bab etiology lan pathogenesis saka MC25,26,27. Adhedhasar panaliten sadurunge, kita nemokake manawa otoimun nduweni peran penting ing kedadeyan lan pangembangan MC12. Panliten iki nliti ekspresi kuantitatif IL-4, IL-17, lan IFN-γ, sing minangka jalur diferensiasi utama sel CD4 + sawise stimulasi antigen. Ing panliten kita, dibandhingake karo klompok negatif, klompok NPE nduweni ekspresi IL-4, IL-17, lan IFN-γ sing luwih dhuwur, lan tingkat protein IL-4 lan IL-17 uga luwih dhuwur.
Secara klinis, ekspresi mRNA IL-17 tambah ing sel NP saka pasien karo herniasi disk28. Peningkatan tingkat ekspresi IL-4 lan IFN-γ uga ditemokake ing model herniasi disk non-compressive akut dibandhingake karo kontrol sehat29. IL-17 nduweni peran kunci ing inflamasi, ciloko jaringan ing penyakit otoimun30 lan ningkatake respon imun kanggo IFN-γ31. Cedera jaringan sing dimediasi IL-17 sing ditingkatake wis dilaporake ing MRL / lpr mice32 lan tikus sing rentan karo autoimun33. IL-4 bisa nyandhet ekspresi sitokin proinflamasi (kayata IL-1β lan TNFα) lan aktivasi makrofag34. Dilaporake yen ekspresi mRNA IL-4 beda ing klompok NPE dibandhingake karo IL-17 lan IFN-γ ing titik wektu sing padha; Ekspresi mRNA saka IFN-γ ing klompok NPE luwih dhuwur tinimbang ing klompok liya. Mulane, produksi IFN-γ bisa dadi mediator saka respon inflamasi sing disebabake dening interkalasi NP. Panaliten nuduhake yen IFN-γ diprodhuksi dening macem-macem jinis sel, kalebu sel T helper tipe 1 sing diaktifake, sel pembunuh alami, lan makrofag35,36, lan minangka sitokin pro-inflamasi kunci sing ningkatake respon imun37.
Panaliten iki nuduhake manawa respon otoimun bisa uga ana ing kedadeyan lan pangembangan MC. Luoma et al. nemokake yen karakteristik sinyal MC lan NP sing misuwur padha karo MRI, lan loro-lorone nuduhake sinyal dhuwur ing urutan T2W38. Sawetara sitokin wis dikonfirmasi ana hubungane karo kedadeyan MC, kayata IL-139. Mbah et al. nyaranake yen tonjolan munggah utawa mudhun saka NP bisa duwe pengaruh gedhe ing kedadeyan lan pangembangan MC12. Bobechko40 lan Herzbein et al.41 nyatakake yen NP minangka jaringan imunotoleran sing ora bisa mlebu sirkulasi vaskular wiwit lair. Tonjolan NP ngenalake benda asing menyang pasokan getih, saéngga mediasi reaksi otoimun lokal42. Reaksi otoimun bisa nyebabake akeh faktor kekebalan, lan nalika faktor kasebut terus-terusan katon ing jaringan, bisa nyebabake owah-owahan ing sinyal43. Ing panliten iki, overexpression IL-4, IL-17 lan IFN-γ minangka faktor imun sing khas, luwih mbuktekake hubungan sing cedhak antarane NP lan MCs44. Model kewan iki uga niru terobosan NP lan mlebu menyang piring pungkasan. Proses iki luwih nuduhake pengaruh otoimunitas ing MC.
Kaya sing dikarepake, model kewan iki nyedhiyakake platform kanggo sinau MC. Nanging, model iki isih duwe sawetara watesan: sepisanan, sajrone fase pengamatan kewan, sawetara terwelu tahap menengah kudu euthanized kanggo tes biologi histologis lan molekuler, saengga sawetara kewan "ora bisa digunakake" liwat wektu. Kapindho, sanajan telung titik wektu ditetepake ing panliten iki, sayangé, mung model siji jinis MC (Modic type I change), mula ora cukup kanggo makili proses pangembangan penyakit manungsa, lan luwih akeh titik wektu kudu disetel kanggo luwih apik mirsani kabeh owah-owahan sinyal. Katelu, owah-owahan ing struktur jaringan pancen bisa ditampilake kanthi jelas kanthi pewarnaan histologis, nanging sawetara teknik khusus luwih bisa mbukak owah-owahan mikrostruktur ing model iki. Contone, mikroskop cahya polarisasi digunakake kanggo nganalisa pembentukan fibrocartilage ing cakram intervertebral terwelu45. Efek jangka panjang NP ing MC lan endplate mbutuhake sinau luwih lanjut.
Sèket papat kelinci putih Selandia Baru lanang (bobot watara 2.5-3 kg, umur 3-3.5 sasi) dipérang sacara acak dadi klompok operasi palsu, klompok implantasi otot (kelompok ME) lan klompok implantasi akar saraf (grup NPE). Kabeh prosedur eksperimen disetujoni dening Komite Etika Rumah Sakit Tianjin, lan metode eksperimen ditindakake kanthi ketat karo pedoman sing disetujoni.
Sawetara dandan wis ditindakake kanggo teknik bedhah S. Sobajima 46 . Saben terwelu dilebokake ing posisi recumbency lateral lan permukaan anterior saka limang cakram intervertebral lumbar (IVDs) sing berturut-turut diekspos kanthi nggunakake pendekatan retroperitoneal posterolateral. Saben terwelu diwenehi anestesi umum (20% urethane, 5 ml / kg liwat vena kuping). Irisan kulit longitudinal digawe saka pinggir ngisor iga menyang pinggir pelvis, 2 cm ventral menyang otot paravertebral. Spine anterolateral tengen saka L1 nganti L6 katon kanthi diseksi sing cetha lan tumpul saka jaringan subkutan, jaringan retroperitoneal, lan otot ing ndhuwur (Gambar 6A). Tingkat cakram ditemtokake nggunakake pinggir pelvis minangka landmark anatomi kanggo tingkat cakram L5-L6. Gunakake jarum suntik 16-gauge kanggo pengeboran bolongan cedhak piring mburi vertebra L5 kanggo ambane 3 mm (Fig. 6B). Gunakake jarum suntik 5-ml kanggo nyedhot nukleus pulposus autologous ing disk intervertebral L1-L2 (Gambar 6C). Copot inti pulposus utawa otot miturut syarat saben klompok. Sawise bolongan pengeboran jero, jahitan sing bisa diserap dilebokake ing fascia jero, fascia superficial lan kulit, kanthi ati-ati supaya ora ngrusak jaringan periosteal awak vertebral sajrone operasi.
(A) Cakram L5-L6 kapapar liwat pendekatan retroperitoneal posterolateral. (B) Gunakake jarum 16-gauge kanggo pengeboran bolongan cedhak endplate L5. (C) MF Autologous dipanen.
Anestesi umum diwenehake kanthi urethane 20% (5 ml / kg) sing diwenehake liwat vena kuping, lan radiografi tulang belakang lumbar diulang ing minggu 12, 16, lan 20 sawise operasi.
Kelinci dikorbanake kanthi injeksi intramuskular ketamin (25.0 mg / kg) lan natrium pentobarbital intravena (1.2 g / kg) ing 12, 16 lan 20 minggu sawise operasi. Kabeh balung mburi dibusak kanggo analisis histologis lan analisis nyata ditindakake. Transkripsi mbalikke kuantitatif (RT-qPCR) lan Western blotting digunakake kanggo ndeteksi owah-owahan ing faktor imun.
Pemeriksaan MRI ditindakake ing terwelu kanthi nggunakake magnet klinis 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) sing dilengkapi karo panrima coil limb orthogonal. Kelinci dibius nganggo urethane 20% (5 mL/kg) liwat vena kuping banjur dilebokake ing njero magnet kanthi wilayah lumbar sing dipusatake ing gulungan permukaan bunder diameter 5 inci (GE Medical Systems). Gambar localizer berbobot Coronal T2 (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) dipikolehi kanggo nemtokake lokasi cakram lumbar saka L3-L4 nganti L5-L6. Irisan T2-bobot bidang Sagittal dipikolehi kanthi setelan ing ngisor iki: urutan spin-echo cepet kanthi wektu pengulangan (TR) 2200 ms lan wektu gema (TE) 70 ms, matriks; lapangan visual 260 lan wolung rangsangan; Ketebalan pemotongan yaiku 2 mm, celah 0,2 mm.
Sawise foto pungkasan dijupuk lan terwelu pungkasan dipateni, cakram palsu, otot-ditempelake, lan NP dibusak kanggo pemeriksaan histologis. Tisu disimpen ing 10% formalin buffer netral sajrone 1 minggu, decalcified karo asam ethylenediaminetetraacetic, lan parafin dipotong. Blok jaringan dilebokake ing parafin lan dipotong dadi bagean sagittal (kandel 5 μm) nggunakake microtome. Bagian kasebut diwarnai karo hematoxylin lan eosin (H&E).
Sawise ngumpulake cakram intervertebral saka kelinci ing saben klompok, total RNA diekstraksi nggunakake kolom UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) miturut instruksi pabrikan lan sistem transkripsi terbalik ImProm II (Promega Inc. , Madison, WI, USA). Transkripsi mbalikke ditindakake.
RT-qPCR dileksanakake nggunakake prisma 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) lan SYBR Green Langsung Mulai Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) miturut instruksi pabrik. Volume reaksi PCR yaiku 20 μl lan ngemot 1,5 μl cDNA sing diencerake lan 0,2 μM saben primer. Primer dirancang dening OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) lan diprodhuksi dening Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) (Tabel 1). Kondisi siklus termal ing ngisor iki digunakake: langkah aktivasi polimerase awal ing 94 ° C kanggo 2 menit, banjur 40 siklus saben 15 detik ing 94 ° C kanggo denaturasi template, anil kanggo 1 menit ing 60 ° C, ekstensi, lan fluoresensi. pangukuran ditindakake 1 menit ing suhu 72 ° C. Kabeh sampel digedhekake kaping telu lan nilai rata-rata digunakake kanggo analisis RT-qPCR. Data amplifikasi dianalisis nggunakake FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Ekspresi gen IL-4, IL-17, lan IFN-γ dinormalisasi menyang kontrol endogen (ACTB). Tingkat ekspresi relatif mRNA target diitung nggunakake metode 2-ΔΔCT.
Protein total diekstraksi saka jaringan nggunakake homogenizer jaringan ing buffer lisis RIPA (ngandhut koktail inhibitor protease lan fosfatase) lan banjur disentrifugasi ing 13.000 rpm kanggo 20 menit ing 4 ° C kanggo mbusak lebu jaringan. Sèket mikrogram protein dimuat saben jalur, dipisahake karo 10% SDS-PAGE, banjur ditransfer menyang membran PVDF. Pamblokiran ditindakake ing susu garing tanpa lemak 5% ing Tris-buffered saline (TBS) sing ngemot 0,1% Tween 20 kanggo 1 jam ing suhu kamar. Membran kasebut diinkubasi karo antibodi primer anti-dekorin terwelu (diencerke 1:200; Boster, Wuhan, China) (diencerke 1:200; Bioss, Beijing, China) sewengi ing suhu 4 ° C lan bereaksi ing dina kapindho; kanthi antibodi sekunder (imunoglobulin G anti-terwelu wedhus kanthi pengenceran 1:40.000) digabungake karo peroksidase lobak (Boster, Wuhan, China) sajrone 1 jam ing suhu kamar. Sinyal blot Western dideteksi kanthi tambah chemiluminescence ing membran chemiluminescent sawise iradiasi sinar-X. Kanggo analisis densitometrik, blots dipindai lan diukur nggunakake piranti lunak BandScan lan asil kasebut dituduhake minangka rasio immunoreactivity gen target kanggo immunoreactivity tubulin.
Petungan statistik ditindakake nggunakake paket piranti lunak SPSS16.0 (SPSS, USA). Data sing diklumpukake sajrone panliten kasebut dituduhake minangka rata-rata ± standar deviasi (rata-rata ± SD) lan dianalisis kanthi nggunakake analisis varians (ANOVA) kanggo nemtokake beda antarane rong klompok kasebut. P <0,05 dianggep signifikan sacara statistik.
Mangkono, panyiapan model kewan MC kanthi implantasi NPs autologous menyang awak vertebral lan nindakake pengamatan makroanatomi, analisis MRI, evaluasi histologis lan analisis biologi molekuler bisa dadi alat penting kanggo netepake lan mangerteni mekanisme MC manungsa lan ngembangake terapi anyar. intervensi.
Piye carane ngutip artikel iki: Han, C. et al. Model kewan saka owah-owahan Modic ditetepake kanthi implant autologous nucleus pulposus menyang balung subchondral saka utomo lumbar. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038 / srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., lan Boos, N. Pencitraan resonansi magnetik saka spine lumbar: prevalensi herniasi lan retensi cakram, kompresi akar saraf, kelainan plate pungkasan, lan osteoarthritis sendi facet ing sukarelawan asimtomatik . rate. Radiologi 209, 661–666, doi:10.1148/radiologi.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, lan Leboeuf-Eed, K. owah-owahan Modic lan hubungane karo temuan klinis. European Spine Journal: publikasi resmi European Spine Society, European Society of Spinal Deformity, lan European Society for Cervical Spine Research 15, 1312-1319, doi: 10.1007 / s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Owah-owahan modis ing endplates vertebral lumbar: prevalensi lan asosiasi karo nyeri punggung lan sciatica ing buruh lanang setengah baya. balung mburi 32, 1116-1122, doi: 10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., lan Dalinka, M. MRI saka owah-owahan sumsum balung cedhak piring pungkasan ing penyakit degeneratif saka tulang belakang lumbar. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, lan Carter, JR Penyakit cakram degeneratif: evaluasi owah-owahan sumsum vertebral karo MRI. Radiologi 166, 193–199, doi:10.1148/radiologi.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, lan Carter, JR Imaging saka penyakit disk degeneratif. Radiologi 168, 177–186, doi: 10.1148/radiologi.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Prediktor sinyal endplate neovertebral (Modic) owah-owahan ing populasi umum. European Spine Journal: Publikasi Resmi European Spine Society, European Society of Spinal Deformity, lan European Society for Cervical Spine Research, Divisi 19, 129-135, doi: 10.1007 / s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB lan Mannisch, K. Modic owah-owahan sawise herniasi cakram lumbar. European Spine Journal : Publikasi Resmi European Spine Society, European Society of Spinal Deformity lan European Society for Cervical Spine Research 16, 977-982, doi: 10.1007 / s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., lan Kaapa, E. Modic tipe I owah-owahan bisa prédhiksi degenerasi cakram deformasi progresif kanthi cepet: studi prospektif 1 taun. European Spine Journal 21, 1135-1142, doi: 10.1007 / s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ lan Fan, SW owah-owahan Modic: bisa nimbulaké lan kontribusi kanggo degenerasi cakram lumbar. Hipotesis Medis 73, 930-932, doi: 10.1016 / j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Pecah disk internal. Masalah prolaps disk luwih saka 50 taun. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650-653 (1986).
Wektu kirim: Dec-13-2024