Matur nuwun sampun ngunjungi Nature.com. Versi browser sing sampeyan gunakake nduweni dhukungan CSS sing winates. Kanggo asil sing paling apik, disaranake nggunakake browser sing luwih anyar (utawa mateni mode kompatibilitas ing Internet Explorer). Kangge, kanggo njamin dhukungan sing terus-terusan, kita bakal nampilake situs tanpa gaya lan JavaScript.
Pambentukan model kewan saka owah-owahan modik (MC) minangka dhasar penting kanggo nyinaoni MC. Sewidak papat terwelu Putih Selandia Baru dipérang dadi klompok operasi palsu, klompok implantasi otot (grup ME) lan klompok implantasi nukleus pulposus (grup NPE). Ing klompok NPE, cakram intervertebral diekspos kanthi pendekatan bedhah lumbar anterolateral lan jarum digunakake kanggo nusuk awak vertebral L5 cedhak pelat ujung. NP diekstrak saka cakram intervertebral L1/2 nganggo jarum suntik lan disuntikake menyang njero. Ngebor bolongan ing balung subkondral. Prosedur bedhah lan metode pengeboran ing klompok implantasi otot lan klompok operasi palsu padha karo ing klompok implantasi NP. Ing klompok ME, sepotong otot dilebokake ing bolongan, dene ing klompok operasi palsu, ora ana sing dilebokake ing bolongan. Sawise operasi, pemindaian MRI lan tes biologis molekuler ditindakake. Sinyal ing klompok NPE owah, nanging ora ana owah-owahan sinyal sing jelas ing klompok operasi palsu lan klompok ME. Pengamatan histologis nuduhake yen proliferasi jaringan abnormal diamati ing situs implantasi, lan ekspresi IL-4, IL-17 lan IFN-γ tambah ing klompok NPE. Implantasi NP menyang balung subkondral bisa mbentuk model kewan MC.
Owah-owahan modik (MC) yaiku lesi ing endplate vertebral lan sumsum balung sing cedhak sing katon ing pencitraan resonansi magnetik (MRI). Iki cukup umum ing individu sing duwe gejala sing gegandhengan1. Akeh panliten sing nandheske pentinge MC amarga ana hubungane karo nyeri punggung ngisor (LBP)2,3. de Roos et al.4 lan Modic et al.5 kanthi mandiri pisanan njlentrehake telung jinis kelainan sinyal subkondral ing sumsum balung vertebral. Owah-owahan tipe I modik yaiku hipointense ing urutan T1-weighted (T1W) lan hiperintense ing urutan T2-weighted (T2W). Lesi iki nuduhake endplate fissure lan jaringan granulasi vaskular sing cedhak ing sumsum balung. Owah-owahan tipe II modik nuduhake sinyal sing dhuwur ing urutan T1W lan T2W. Ing jinis lesi iki, karusakan endplate bisa ditemokake, uga panggantos lemak histologis saka sumsum balung sing cedhak. Owah-owahan tipe III modik nuduhake sinyal sing kurang ing urutan T1W lan T2W. Lesi sklerotik sing cocog karo endplate wis diamati6. MC dianggep minangka penyakit patologis ing balung mburi lan ana gandheng cenenge karo akeh penyakit degeneratif ing balung mburi7,8,9.
Ngelingi data sing kasedhiya, sawetara panliten wis menehi wawasan rinci babagan etiologi lan mekanisme patologis MC. Albert et al. ngusulake manawa MC bisa uga disebabake dening herniasi diskus8. Hu et al. ngubungake MC karo degenerasi diskus sing parah10. Kroc ngusulake konsep "pecah diskus internal," sing nyatakake manawa trauma diskus sing bola-bali bisa nyebabake mikrorobekan ing endplate. Sawise pembentukan celah, karusakan endplate dening nucleus pulposus (NP) bisa micu respon autoimun, sing luwih lanjut nyebabake perkembangan MC11. Ma et al. duwe pandangan sing padha lan nglaporake manawa autoimunitas sing diinduksi NP nduweni peran penting ing patogenesis MC12.
Sel sistem kekebalan awak, utamane limfosit T helper CD4+, nduweni peran penting ing patogenesis autoimunitas13. Subkumpulan Th17 sing nembe ditemokake ngasilake sitokin proinflamasi IL-17, ningkatake ekspresi kemokin, lan ngrangsang sel T ing organ sing rusak kanggo ngasilake IFN-γ14. Sel Th2 uga nduweni peran unik ing patogenesis respon imun. Ekspresi IL-4 minangka sel Th2 sing representatif bisa nyebabake akibat imunopatologis sing parah15.
Senajan akeh panliten klinis sing wis ditindakake babagan MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, isih ana kekurangan model eksperimen kewan sing cocog sing bisa niru proses MC sing kerep kedadeyan ing manungsa lan bisa digunakake kanggo nyelidiki etiologi utawa perawatan anyar kayata terapi sing ditargetake. Nganti saiki, mung sawetara model kewan MC sing dilaporake nyinaoni mekanisme patologis sing ndasari.
Adhedhasar téori autoimun sing diusulaké déning Albert lan Ma, panlitèn iki nggawé model MC terwelu sing prasaja lan bisa direproduksi kanthi autotransplantasi NP cedhak lempeng ujung vertebra sing dibor. Tujuan liyané yaiku kanggo mirsani karakteristik histologis model kéwan lan ngevaluasi mekanisme spesifik NP ing perkembangan MC. Kanggo tujuan iki, kita nggunakaké teknik kaya ta biologi molekuler, MRI, lan panlitèn histologis kanggo nyinaoni perkembangan MC.
Rong terwelu mati amarga getihen nalika operasi, lan papat terwelu mati nalika anestesi nalika MRI. 48 terwelu liyane slamet lan ora nuduhake tandha-tandha prilaku utawa neurologis sawise operasi.
MRI nuduhake yen intensitas sinyal jaringan sing dilebokake ing bolongan sing beda-beda iku beda. Intensitas sinyal awak vertebral L5 ing klompok NPE mboko sithik owah ing 12, 16 lan 20 minggu sawise penyisipan (urutan T1W nuduhake sinyal sing endhek, lan urutan T2W nuduhake sinyal campuran ditambah sinyal sing endhek) (Gambar 1C), dene penampilan MRI saka rong klompok bagean sing dilebokake liyane tetep relatif stabil sajrone periode sing padha (Gambar 1A, B).
(A) MRI sekuensial representatif saka balung mburi lumbar terwelu ing 3 titik wektu. Ora ana kelainan sinyal sing ditemokake ing gambar klompok operasi sham. (B) Karakteristik sinyal awak vertebral ing klompok ME padha karo sing ana ing klompok operasi sham, lan ora ana owah-owahan sinyal sing signifikan sing diamati ing situs penyematan sajrone wektu. (C) Ing klompok NPE, sinyal endhek katon jelas ing urutan T1W, lan sinyal campuran lan sinyal endhek katon jelas ing urutan T2W. Saka periode 12 minggu nganti periode 20 minggu, sinyal dhuwur sporadis sing ngubengi sinyal endhek ing urutan T2W mudhun.
Hiperplasia balung sing jelas bisa dideleng ing situs implantasi awak vertebral ing klompok NPE, lan hiperplasia balung kedadeyan luwih cepet saka 12 nganti 20 minggu (Gambar 2C) dibandhingake karo klompok NPE, ora ana owah-owahan sing signifikan sing diamati ing awak vertebral sing dimodelake; klompok Sham lan klompok ME (Gambar 2C) 2A,B).
(A) Permukaan awak vertebra ing bagean sing ditanem alus banget, bolongane mari kanthi apik, lan ora ana hiperplasia ing awak vertebra. (B) Wangun situs sing ditanem ing klompok ME padha karo ing klompok operasi palsu, lan ora ana owah-owahan sing jelas ing tampilan situs sing ditanem sajrone wektu. (C) Hiperplasia balung kedadeyan ing situs sing ditanem ing klompok NPE. Hiperplasia balung mundhak kanthi cepet lan malah ngluwihi cakram intervertebral menyang awak vertebra kontralateral.
Analisis histologis nyedhiyakake informasi sing luwih rinci babagan pembentukan balung. Gambar 3 nuduhake foto-foto bagean pasca operasi sing diwarnai nganggo H&E. Ing klompok operasi palsu, kondrosit disusun kanthi apik lan ora ana proliferasi sel sing dideteksi (Gambar 3A). Kahanan ing klompok ME padha karo ing klompok operasi palsu (Gambar 3B). Nanging, ing klompok NPE, akeh kondrosit lan proliferasi sel kaya NP sing diamati ing situs implantasi (Gambar 3C);
(A) Trabekula bisa dideleng cedhak karo pelat ujung, kondrosit disusun rapi kanthi ukuran lan bentuk sel sing seragam lan ora ana proliferasi (kaping 40). (B) Kondisi situs implantasi ing klompok ME padha karo klompok palsu. Trabekula lan kondrosit bisa dideleng, nanging ora ana proliferasi sing jelas ing situs implantasi (kaping 40). (B) Bisa dideleng manawa kondrosit lan sel kaya NP proliferasi kanthi signifikan, lan bentuk lan ukuran kondrosit ora rata (kaping 40).
Ekspresi mRNA interleukin 4 (IL-4), mRNA interleukin 17 (IL-17), lan mRNA interferon γ (IFN-γ) diamati ing klompok NPE lan ME. Nalika tingkat ekspresi gen target dibandhingake, ekspresi gen IL-4, IL-17, lan IFN-γ tambah signifikan ing klompok NPE dibandhingake karo klompok ME lan klompok operasi palsu (Gambar 4) (P < 0,05). Dibandhingake karo klompok operasi palsu, tingkat ekspresi IL-4, IL-17, lan IFN-γ ing klompok ME mung tambah sithik lan ora tekan owah-owahan statistik (P > 0,05).
Ekspresi mRNA IL-4, IL-17 lan IFN-γ ing klompok NPE nuduhake tren sing luwih dhuwur tinimbang ing klompok operasi palsu lan klompok ME (P < 0,05).
Kosok baline, tingkat ekspresi ing klompok ME ora nuduhake bedane sing signifikan (P>0,05).
Analisis Western blot ditindakake nggunakake antibodi sing kasedhiya sacara komersial nglawan IL-4 lan IL-17 kanggo ngonfirmasi pola ekspresi mRNA sing diganti. Kaya sing dituduhake ing Gambar 5A, B, dibandhingake karo klompok ME lan klompok operasi palsu, tingkat protein IL-4 lan IL-17 ing klompok NPE tambah signifikan (P < 0,05). Dibandhingake karo klompok operasi palsu, tingkat protein IL-4 lan IL-17 ing klompok ME uga gagal nggayuh owah-owahan sing signifikan sacara statistik (P> 0,05).
(A) Kadar protein IL-4 lan IL-17 ing klompok NPE luwih dhuwur tinimbang ing klompok ME lan klompok plasebo (P < 0,05). (B) Histogram Western blot.
Amarga jumlah sampel manungsa sing dipikolehi sajrone operasi winates, panliten sing jelas lan rinci babagan patogenesis MC rada angel. Kita nyoba nggawe model kewan MC kanggo nyinaoni mekanisme patologis potensial. Ing wektu sing padha, evaluasi radiologis, evaluasi histologis, lan evaluasi biologis molekuler digunakake kanggo ngetutake dalane MC sing diinduksi dening autograft NP. Akibate, model implantasi NP nyebabake owah-owahan intensitas sinyal kanthi bertahap saka titik wektu 12 minggu nganti 20 minggu (sinyal rendah campuran ing urutan T1W lan sinyal rendah ing urutan T2W), sing nuduhake owah-owahan jaringan, lan evaluasi biologis histologis lan molekuler ngonfirmasi asil panliten radiologis.
Asil saka eksperimen iki nuduhake yen owah-owahan visual lan histologis kedadeyan ing lokasi pelanggaran awak vertebral ing klompok NPE. Ing wektu sing padha, ekspresi gen IL-4, IL-17 lan IFN-γ, uga IL-4, IL-17 lan IFN-γ diamati, nuduhake yen pelanggaran jaringan nukleus pulposus autologus ing awak vertebral bisa nyebabake serangkaian owah-owahan sinyal lan morfologis. Gampang ditemokake yen karakteristik sinyal awak vertebral model kewan (sinyal rendah ing urutan T1W, sinyal campuran lan sinyal rendah ing urutan T2W) meh padha karo sel vertebral manungsa, lan karakteristik MRI uga ngonfirmasi pengamatan histologi lan anatomi kasar, yaiku, owah-owahan ing sel awak vertebral progresif. Sanajan respon inflamasi sing disebabake dening trauma akut bisa uga katon ora suwe sawise tusukan, asil MRI nuduhake yen owah-owahan sinyal sing saya tambah katon 12 minggu sawise tusukan lan terus nganti 20 minggu tanpa ana tandha-tandha pemulihan utawa pembalikan owah-owahan MRI. Asil iki nuduhake yen NP vertebral autologus minangka metode sing bisa dipercaya kanggo netepake MV progresif ing terwelu.
Model tusukan iki mbutuhake katrampilan, wektu, lan gaweyan bedhah sing cukup. Ing eksperimen awal, diseksi utawa stimulasi struktur ligamen paravertebral sing berlebihan bisa nyebabake pembentukan osteofit vertebral. Ati-ati aja nganti ngrusak utawa ngganggu cakram sing jejer. Amarga jerone penetrasi kudu dikontrol kanggo entuk asil sing konsisten lan bisa direproduksi, kita nggawe colokan kanthi manual kanthi ngethok sarung jarum sing dawane 3 mm. Nggunakake colokan iki njamin jerone pengeboran sing seragam ing awak vertebral. Ing eksperimen awal, telung ahli bedah ortopedi sing melu operasi kasebut nemokake jarum 16-gauge luwih gampang digunakake tinimbang jarum 18-gauge utawa cara liyane. Kanggo nyegah getihen sing berlebihan sajrone pengeboran, nyekeli jarum kanthi tetep sawetara wektu bakal nyedhiyakake bolongan penyisipan sing luwih cocog, sing nuduhake yen derajat MC tartamtu bisa dikontrol kanthi cara iki.
Senajan akeh panliten sing nargetake MC, sethithik sing dingerteni babagan etiologi lan patogenesis MC25,26,27. Adhedhasar panliten sadurunge, kita nemokake manawa autoimunitas nduweni peran penting ing kedadeyan lan perkembangan MC12. Panliten iki nliti ekspresi kuantitatif IL-4, IL-17, lan IFN-γ, sing minangka jalur diferensiasi utama sel CD4+ sawise stimulasi antigen. Ing panliten kita, dibandhingake karo klompok negatif, klompok NPE duwe ekspresi IL-4, IL-17, lan IFN-γ sing luwih dhuwur, lan tingkat protein IL-4 lan IL-17 uga luwih dhuwur.
Sacara klinis, ekspresi mRNA IL-17 mundhak ing sel NP saka pasien kanthi herniasi diskus28. Peningkatan tingkat ekspresi IL-4 lan IFN-γ uga ditemokake ing model herniasi diskus non-kompresi akut dibandhingake karo kontrol sehat29. IL-17 nduweni peran penting ing inflamasi, cedera jaringan ing penyakit autoimun30 lan nambah respon imun marang IFN-γ31. Peningkatan cedera jaringan sing dimediasi IL-17 wis dilaporake ing tikus MRL/lpr32 lan tikus sing rentan autoimun33. IL-4 bisa nyegah ekspresi sitokin proinflamasi (kayata IL-1β lan TNFα) lan aktivasi makrofag34. Dilaporake manawa ekspresi mRNA IL-4 beda ing klompok NPE dibandhingake karo IL-17 lan IFN-γ ing wektu sing padha; Ekspresi mRNA IFN-γ ing klompok NPE luwih dhuwur tinimbang klompok liyane. Mulane, produksi IFN-γ bisa dadi mediator respon inflamasi sing disebabake dening interkalasi NP. Panliten nuduhake yen IFN-γ diprodhuksi dening pirang-pirang jinis sel, kalebu sel T helper tipe 1 sing diaktifake, sel pembunuh alami, lan makrofag35,36, lan minangka sitokin pro-inflamasi utama sing ningkatake respon imun37.
Panliten iki nuduhake yen respon autoimun bisa uga melu kedadeyan lan perkembangan MC. Luoma et al. nemokake yen karakteristik sinyal MC lan NP sing prominent padha ing MRI, lan loro-lorone nuduhake sinyal sing dhuwur ing urutan T2W38. Sawetara sitokin wis dikonfirmasi ana hubungane karo kedadeyan MC, kayata IL-139. Ma et al. menehi saran yen tonjolan NP munggah utawa mudhun bisa uga duwe pengaruh gedhe marang kedadeyan lan perkembangan MC12. Bobechko40 lan Herzbein et al.41 nglaporake yen NP minangka jaringan imunotoleran sing ora bisa mlebu sirkulasi vaskular wiwit lair. Tonjolan NP ngenalake benda asing menyang pasokan getih, saengga dadi mediator reaksi autoimun lokal42. Reaksi autoimun bisa nyebabake akeh faktor kekebalan, lan nalika faktor kasebut terus-terusan kena jaringan, bisa nyebabake owah-owahan ing sinyal43. Ing panliten iki, ekspresi IL-4, IL-17 lan IFN-γ sing berlebihan minangka faktor kekebalan sing khas, sing luwih mbuktekake hubungan sing cedhak antarane NP lan MC44. Model kéwan iki niru kanthi apik terobosan NP lan mlebune menyang end plate. Proses iki luwih lanjut nuduhake dampak autoimunitas marang MC.
Kaya sing dikarepake, model kewan iki menehi kita platform sing bisa digunakake kanggo nyinaoni MC. Nanging, model iki isih duwe sawetara watesan: pisanan, sajrone fase pengamatan kewan, sawetara terwelu tahap menengah kudu dieutanasia kanggo uji biologi histologis lan molekuler, saengga sawetara kewan "ora digunakake" suwe-suwe. Kapindho, sanajan telung titik wektu disetel ing panliten iki, sayangé, kita mung model siji jinis MC (owah-owahan tipe I Modic), mula ora cukup kanggo makili proses perkembangan penyakit manungsa, lan luwih akeh titik wektu kudu disetel kanggo mirsani kabeh owah-owahan sinyal kanthi luwih apik. Katelu, owah-owahan ing struktur jaringan pancen bisa dituduhake kanthi jelas kanthi pewarnaan histologis, nanging sawetara teknik khusus bisa luwih apik mbukak owah-owahan mikrostruktural ing model iki. Contone, mikroskop cahya terpolarisasi digunakake kanggo nganalisis pembentukan fibrocartilage ing cakram intervertebral terwelu45. Efek jangka panjang NP ing MC lan endplate mbutuhake panliten luwih lanjut.
Seket papat terwelu putih Selandia Baru lanang (bobote udakara 2,5-3 kg, umur 3-3,5 sasi) dipérang kanthi acak dadi klompok operasi palsu, klompok implantasi otot (klompok ME) lan klompok implantasi oyot saraf (klompok NPE). Kabeh prosedur eksperimen wis disetujoni dening Komite Etik Rumah Sakit Tianjin, lan metode eksperimen ditindakake kanthi ketat miturut pedoman sing wis disetujoni.
Sawetara perbaikan wis ditindakake kanggo teknik bedhah S. Sobajima 46. Saben terwelu diselehake ing posisi recumbency lateral lan permukaan anterior saka limang cakram intervertebral lumbar (IVD) sing berturut-turut diekspos nggunakake pendekatan retroperitoneal posterolateral. Saben terwelu diwenehi anestesi umum (20% uretan, 5 ml/kg liwat vena kuping). Sayatan kulit longitudinal digawe saka pinggir ngisor iga nganti pinggiran panggul, 2 cm ventral nganti otot paravertebral. Tulang belakang anterolateral tengen saka L1 nganti L6 diekspos kanthi diseksi sing tajem lan tumpul saka jaringan subkutan, jaringan retroperitoneal, lan otot sing ana ing ndhuwur (Gambar 6A). Tingkat cakram ditemtokake nggunakake pinggiran panggul minangka landmark anatomi kanggo tingkat cakram L5-L6. Gunakake jarum tusukan 16-gauge kanggo ngebor bolongan cedhak pelat ujung vertebra L5 nganti jerone 3 mm (Gambar 6B). Gunakna jarum suntik 5 ml kanggo nyedhot nukleus pulposus autologus ing cakram intervertebral L1-L2 (Gambar 6C). Copot nukleus pulposus utawa otot miturut kabutuhan saben klompok. Sawise bolongan bor luwih jero, jahitan sing bisa diserap dipasang ing fasia jero, fasia superfisial, lan kulit, kanthi ati-ati supaya ora ngrusak jaringan periosteal awak vertebral sajrone operasi.
(A) Disk L5–L6 diekspos liwat pendekatan retroperitoneal posterolateral. (B) Gunakake jarum 16-gauge kanggo ngebor bolongan cedhak endplate L5. (C) MF autologus dipanen.
Anestesi umum diwenehake nganggo uretan 20% (5 ml/kg) sing diwenehake liwat vena kuping, lan radiografi tulang punggung lumbar diulang ing minggu ke-12, 16, lan 20 pasca operasi.
Terwelu dikorbanake kanthi injeksi ketamin intramuskular (25,0 mg/kg) lan natrium pentobarbital intravena (1,2 g/kg) ing minggu kaping 12, 16, lan 20 sawise operasi. Kabeh balung mburi dicopot kanggo analisis histologis lan analisis nyata ditindakake. Transkripsi terbalik kuantitatif (RT-qPCR) lan Western blotting digunakake kanggo ndeteksi owah-owahan faktor kekebalan.
Pamriksaan MRI ditindakake ing terwelu nggunakake magnet klinis 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) sing dilengkapi panrima koil tungkai ortogonal. Terwelu dibius nganggo uretan 20% (5 mL/kg) liwat vena kuping banjur dilebokake ing njero magnet kanthi wilayah lumbar sing dipusatake ing koil permukaan bunder diameter 5 inci (GE Medical Systems). Gambar lokalizer berbobot T2 koronal (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) dijupuk kanggo nemtokake lokasi cakram lumbar saka L3-L4 nganti L5-L6. Irisan berbobot T2 bidang sagital dijupuk kanthi setelan ing ngisor iki: urutan gema spin cepet kanthi wektu pengulangan (TR) 2200 ms lan wektu gema (TE) 70 ms, matriks; medan visual 260 lan wolung rangsangan; Kekandelan pemotongan yaiku 2 mm, celah kasebut yaiku 0,2 mm.
Sawisé foto pungkasan dijupuk lan terwelu pungkasan dipatèni, cakram palsu, cakram sing dipasang otot, lan NP dicopot kanggo pamriksan histologis. Jaringan difiksasi ing formalin buffer netral 10% sajrone 1 minggu, didekalsifikasi nganggo asam etilenadiaminatetraasetat, lan parafin dipotong. Blok jaringan dilebokaké ing parafin lan dipotong dadi potongan sagital (tebal 5 μm) nganggo mikrotom. Potongan-potongan kasebut diwernani nganggo hematoksilin lan eosin (H&E).
Sawisé nglumpukaké cakram intervertebral saka terwelu ing saben klompok, total RNA diekstrak nggunakaké kolom UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) miturut pandhuan pabrikan lan sistem transkripsi balik ImProm II (Promega Inc., Madison, WI, USA). Transkripsi balik ditindakake.
RT-qPCR ditindakake nggunakake Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) lan SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) miturut pandhuan pabrikan. Volume reaksi PCR yaiku 20 μl lan ngemot 1,5 μl cDNA sing diencerake lan 0,2 μM saben primer. Primer dirancang dening OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) lan diprodhuksi dening Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) (Tabel 1). Kondisi siklus termal ing ngisor iki digunakake: langkah aktivasi polimerase awal ing 94°C suwene 2 menit, banjur 40 siklus 15 detik saben ing 94°C kanggo denaturasi cithakan, annealing suwene 1 menit ing 60°C, ekstensi, lan fluoresensi. Pangukuran ditindakake suwene 1 menit ing 72°C. Kabeh sampel diamplifikasi kaping telu lan nilai rata-rata digunakake kanggo analisis RT-qPCR. Data amplifikasi dianalisis nggunakake FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Ekspresi gen IL-4, IL-17, lan IFN-γ dinormalisasi menyang kontrol endogen (ACTB). Tingkat ekspresi relatif mRNA target diitung nggunakake metode 2-ΔΔCT.
Protein total diekstrak saka jaringan nggunakake homogenizer jaringan ing buffer lisis RIPA (sing ngemot koktail inhibitor protease lan fosfatase) banjur disentrifugasi kanthi kecepatan 13.000 rpm suwene 20 menit ing suhu 4°C kanggo mbusak lebu jaringan. Seket mikrogram protein dimuat saben jalur, dipisahake karo 10% SDS-PAGE, banjur ditransfer menyang membran PVDF. Pemblokiran ditindakake ing susu garing tanpa lemak 5% ing larutan garam buffer Tris (TBS) sing ngemot 0,1% Tween 20 suwene 1 jam ing suhu kamar. Membran kasebut diinkubasi karo antibodi primer anti-decorin terwelu (diencerke 1:200; Boster, Wuhan, China) (diencerke 1:200; Bioss, Beijing, China) sewengi ing suhu 4°C lan direaksikake ing dina kapindho; karo antibodi sekunder (imunoglobulin G anti-kelinci wedhus kanthi pengenceran 1:40.000) sing digabungake karo peroksidase horseradish (Boster, Wuhan, China) sajrone 1 jam ing suhu kamar. Sinyal Western blot dideteksi kanthi peningkatan kemiluminesensi ing membran kemiluminesensi sawise iradiasi sinar-X. Kanggo analisis densitometrik, blot dipindai lan diukur nggunakake piranti lunak BandScan lan asil kasebut dinyatakake minangka rasio imunoreaktivitas gen target karo imunoreaktivitas tubulin.
Pitungan statistik ditindakake nggunakake paket piranti lunak SPSS16.0 (SPSS, USA). Data sing dikumpulake sajrone panliten kasebut dinyatakake minangka rata-rata ± deviasi standar (rata-rata ± SD) lan dianalisis nggunakake analisis varians ukuran berulang siji arah (ANOVA) kanggo nemtokake bedane antarane rong klompok. P < 0,05 dianggep signifikan sacara statistik.
Dadi, nggawe model kewan MC kanthi nandur NP autolog menyang awak vertebral lan nindakake pengamatan makroanatomis, analisis MRI, evaluasi histologis, lan analisis biologis molekuler bisa dadi alat penting kanggo neliti lan mangerteni mekanisme MC manungsa lan ngembangake intervensi terapeutik anyar.
Cara ngutip artikel iki: Han, C. et al. Model kewan saka owah-owahan Modic digawe kanthi implan nukleus pulposus autologus menyang balung subkondral saka balung mburi lumbar. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., lan Boos, N. Pencitraan resonansi magnetik saka balung mburi lumbar: prevalensi herniasi lan retensi diskus, kompresi oyot saraf, kelainan lempeng ujung, lan osteoarthritis sendi faset ing sukarelawan asimtomatik. tingkat. Radiologi 209, 661–666, doi:10.1148/radiologi.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, lan Leboeuf-Eed, K. Owah-owahan Modic lan hubungane karo temuan klinis. European Spine Journal: publikasi resmi saka European Spine Society, the European Society of Spinal Deformity, lan the European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Owah-owahan modis ing endplates vertebra lumbar: prevalensi lan hubungane karo nyeri punggung ngisor lan sciatica ing pekerja lanang paruh baya. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., lan Dalinka, M. MRI owah-owahan sumsum balung cedhak lempeng pungkasan ing penyakit degeneratif balung mburi lumbar. AJR. Jurnal Radiologi Amerika 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, lan Carter, JR Penyakit cakram degeneratif: evaluasi owah-owahan sumsum tulang belakang nganggo MRI. Radiologi 166, 193–199, doi:10.1148/radiologi.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, lan Carter, JR Pencitraan penyakit cakram degeneratif. Radiologi 168, 177–186, doi: 10.1148/radiologi.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Prediktor neovertebral endplate (Modic) menehi sinyal owah-owahan ing populasi umum. Jurnal Tulang Belakang Eropa: Publikasi Resmi Masyarakat Tulang Belakang Eropa, Masyarakat Deformitas Tulang Belakang Eropa, lan Masyarakat Eropa kanggo Riset Tulang Belakang Serviks, Divisi 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB lan Mannisch, K. Owah-owahan modis sawise herniasi cakram lumbar. Jurnal Balung Geger Eropa: Publikasi Resmi Masyarakat Balung Geger Eropa, Masyarakat Deformitas Balung Geger Eropa lan Masyarakat Eropa kanggo Riset Balung Geger Serviks 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., lan Kaapa, E. Owah-owahan tipe I modik bisa ngramalake degenerasi cakram deformasi sing progresif kanthi cepet: panliten prospektif 1 taun. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ lan Fan, SW Owah-owahan modic: kemungkinan panyebab lan kontribusi kanggo degenerasi cakram lumbar. Hipotesis Medis 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Pecahe cakram internal. Masalah prolaps cakram sajrone 50 taun. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Wektu kiriman: 13 Desember 2024